抗體夾心法檢測(cè)HBsAg過(guò)程及方法雙 
臨床輸血中如果輸入含肝炎標(biāo)志物的血液,有40%-76%受血者將患有肝炎危險(xiǎn).以下我們將介紹用青島捷世康生物科技有限公司銷售的ELISA試劑盒以雙抗體夾心法檢測(cè)乙型肝炎的操作方法以及常見(jiàn)問(wèn)題的解決方法.
實(shí)驗(yàn)原理
ELISA雙抗體夾心法的原理是將特異性抗體結(jié)合到固相載體上形成固相抗體,然后和待檢徐慶忠的相應(yīng)抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合物,洗滌后在加酶標(biāo)抗體,與免疫復(fù)合物中的抗原結(jié)合性成酶標(biāo)抗體-抗原-固相抗體復(fù)合物,加底物顯色,判斷抗原含量,一下我們將以HBsAg為例為您展示我公司生產(chǎn)的ELISA試劑盒的操作.
試劑與器材:
人乙型肝炎表面抗原(HBsAg)ELISA試劑盒(青島捷世康生物科技有限公司)
溫箱
酶標(biāo)反應(yīng)板
酶標(biāo)分光光度計(jì).
操作方法:
1 包被 取包被液適當(dāng)稀釋的HBsAg-IgG 0.1ml,加到聚苯乙烯反應(yīng)板各孔中,最后一孔不加以作為空白對(duì)照.加蓋,4度24小時(shí).次日用洗滌液充分洗滌3次,甩干.
2 隔空內(nèi)加稀釋倍數(shù)的待檢血清0.1ml,同時(shí)加陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清,置于43度溫箱60min,移去液體.同前法洗滌三次,甩干.
3各孔內(nèi)加入稀釋HRP-抗 HBs-IgG 0.1ml,置于43度溫箱60min,移去液體,洗滌三次,甩干.
4 各孔加底物液0.1ml 置于黑暗處20min
5 各孔加入2mol/L H2SO4 0.05ml,終止反應(yīng).
結(jié)果 
1目測(cè)法 陽(yáng)性孔呈橘黃色,陰性孔無(wú)色或及淺黃色.
2 比色法 用酶標(biāo)分光光度計(jì)測(cè) 計(jì)算P/N值.如P/N≥2.1,結(jié)果為陽(yáng)性,負(fù)責(zé)為陰性.
 
雙抗體夾心法試驗(yàn)簡(jiǎn)便,敏感,特異,但試驗(yàn)中需要注意以下問(wèn)題
1 雙抗體夾心法測(cè)定中應(yīng)注意RF的干擾.RF是一種自身抗體,具有和多種動(dòng)物IgG的Fc端結(jié)合的能力.測(cè)定時(shí)可同時(shí)結(jié)合固相抗體和酶標(biāo)抗體,也能催化底物顯色,出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng).反應(yīng)中的抗體試劑若先經(jīng)胃蛋白酶或木瓜蛋白酶處理,去除Fc段可有效改善特異性.
2標(biāo)本應(yīng)無(wú)溶血,因紅細(xì)胞溶解會(huì)釋放出過(guò)氧化物酶活性的底物,再以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中,溶血標(biāo)本有可能導(dǎo)致特異顯色:標(biāo)本以新鮮采集為宜,污染細(xì)菌的標(biāo)本坑能產(chǎn)生非特異顯色,印軍體重可能含有內(nèi)源性HRP.
3 保存過(guò)程最好采用恒溫水浴箱,用塑料黏紙密封反應(yīng)板孔,讓反應(yīng)板飄浮在水面上,如用溫箱應(yīng)放在濕盒中,不能數(shù)塊ELISA板疊放.
青島捷世康生物科技有限公司主營(yíng)ELISA試劑盒 進(jìn)口ELISA試劑盒,國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒,培養(yǎng)基,標(biāo)準(zhǔn)品,部分中檢所產(chǎn)品有優(yōu)惠.我公司將以放心的質(zhì)量服務(wù)您的檢測(cè)試驗(yàn).我公司另提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù).如因標(biāo)本存放及運(yùn)輸要求較高時(shí)可提供上門取樣.歡迎來(lái)電咨詢訂購(gòu).聯(lián)系電話:0532-58720157
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