山梨醇含量試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法 50管/48樣
測(cè)定意義:
山梨醇廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,不僅是糖運(yùn)輸形式之一,而且與生物
抗逆性和食物風(fēng)味密切相關(guān)。因此,在糖代謝、抗逆性和食品研究中經(jīng)常需要檢測(cè)山梨醇含
量變化。
測(cè)定原理:
山梨醇在堿性溶液中與銅離子形成藍(lán)色絡(luò)合物,在655nm波長(zhǎng)有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體10mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:液體10mL×1瓶,4℃保存。
山梨醇的提。
按照組織質(zhì)量(g):蒸餾水體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.2g組織,加入2mL
蒸餾水),研磨成勻漿,置沸水浴中煮沸10分鐘(蓋緊,以防止水分散失),冷卻后,8000g,
常溫離心10min,取上清液待測(cè)。
測(cè)定步驟
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至655nm,蒸餾水調(diào)零。
2、加樣表(在 EP管中依次加入下列試劑):
試劑(μL) 空白管 測(cè)定管
試劑 150 150
試劑二 140 140
樣本 1000
蒸餾水 1000
混勻后室溫靜置15min,8000g,常溫離心10min,取上清液測(cè)655nm下吸光值A,計(jì)算ΔA=A
測(cè)定管-A空白管?瞻坠苤灰鲆还堋
山梨醇含量計(jì)算:
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為 y = 0.352x - 0.002;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值。
2、按照樣本質(zhì)量計(jì)算
山梨醇含量(mg /g鮮重)=[(ΔA+0.002) ÷0.352×V1]÷(W×V1÷V2)=5.68×(ΔA+0.002) ÷W
3、按照樣本蛋白濃度計(jì)算
山梨醇含量(mg /mg prot)=[(ΔA+0.002) ÷0.352×V1]÷(V1×Cpr)=2.84×(ΔA+0.002) ÷Cpr
V1:加入樣本體積,1mL;V2:加入提取液體積,2 mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;
W:樣本質(zhì)量,g
原創(chuàng)作者:青島捷世康生物科技有限公司