果蔬維生素C含量測定及其分析
目的要求
要求學(xué)生在已掌握生物化學(xué)基礎(chǔ)知識、基本理論和基本實驗技能的基礎(chǔ)上，在教師指導(dǎo)下，根據(jù)實驗室條件，完成選題、設(shè)計實驗、實驗準(zhǔn)備、實施實驗和實驗論文撰寫等全過程。培養(yǎng)動手能力，分析解決問題的能力和創(chuàng)新思維。
實驗原理
維生素C是人類營養(yǎng)中最重要的維生素之一，缺少它時會產(chǎn)生壞血病，因此又稱為抗壞血酸（ascorbic acid）。它對物質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)具有重要的作用。近年來，發(fā)現(xiàn)它還有增強機體對腫瘤的抵抗力，并對化學(xué)致癌物有阻斷作用。
維生素C主要存在于新鮮水果及蔬菜中。水果中以獼猴桃含量最多，在檸檬、橘子和橙子中含量也非常豐富。蔬菜以辣椒中的含量最豐富，在番茄、甘藍(lán)、蘿卜、青菜中含量也十分豐富。野生植物以刺梨中的含量最豐富，每100g中含2800mg，有“維生素C王“之稱。維生素C為無色晶體，味酸，溶于水及乙醇，不耐熱，在堿性溶液中極不穩(wěn)定，日光照射后易被氧化破壞，有微量銅、鐵等重金屬離子存在時更易氧化分解，干燥條件下較為穩(wěn)定。故維生素C制劑應(yīng)放在干燥、低溫和避光處保存。在烹調(diào)蔬菜時，不宜燒煮過度并應(yīng)避免接觸堿和銅器。
維生素C具有很強的還原性。它可分為還原性和脫氫型。還原型抗壞血酸能還原染料2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），本身則氧化為脫氫型。在酸性溶液中，2,6-二氯酚靛酚呈紅色，還原后變?yōu)闊o色。因此，當(dāng)用此染料滴定含有維生素C的酸性溶液時，維生素C尚未全部被氧化前，則滴下的染料立即被還原成無色。一旦溶液中的維生素C已全部被氧化時，則滴下的染料立即使溶液變成粉紅色。所以，當(dāng)溶液從無色變成微紅色時即表示溶液中的維生素C剛剛?cè)勘谎趸藭r即為滴定終點。如無其他雜質(zhì)干擾，樣品提取液所還原的標(biāo)準(zhǔn)染料量與樣品中所含還原型抗壞血酸量成正比。
試劑和器材
1、試劑
2%草酸溶液：草酸2g溶于100mL蒸餾水中。
1%草酸溶液：草酸1g溶于100mL蒸餾水中。
標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液（1mg/mL）：準(zhǔn)確稱取100mg純抗壞血酸（應(yīng)為潔白色，如變?yōu)辄S色則不能用）溶于1%草酸溶液中，并稀釋至100mL，貯于棕色瓶中，冷藏。最好臨用前配制。
0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液：250mg 2,6-二氯酚靛酚溶于150mL含有52mg NaHCO3的熱水中，冷卻后加水稀釋至250mL，貯于棕色瓶中冷藏（4℃）約可保存1周。每次臨用時，以標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液標(biāo)定。
2、材料
自選材料
3、器材
錐形瓶100mL（×2）；吸量管10mL（×1）；容量瓶100mL（×），250mL（×1）；微量滴定管5mL（×1）；研缽；漏斗；紗布。
操作方法
1、提取
水洗干凈整株新鮮蔬菜或整個新鮮水果，用紗布或吸水紙吸干表面水分。然后稱取20g，加入20mL2%草酸，用研缽研磨，4層紗布過濾，濾液備用。紗布可用少量2%草酸洗幾次，合并濾液，濾液總體積定容至50mL。
2、標(biāo)準(zhǔn)液滴定
準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液1mL置100mL,錐形瓶中，加9mL1%草酸，用微量滴定管以0.1%，2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡紅色，并保持15s不褪色，即達(dá)終點。由所用染料的體積計算處1mL染料相當(dāng)于多少毫克抗壞血酸（取10mL，1%草酸作空白對照，按以上方法滴定）。
3、樣品滴定
準(zhǔn)確吸取濾液兩份，每份10mL，分別放入2個錐形瓶內(nèi)，滴定方法同前。另取10mL，1%草酸作空白對照滴定。
注意事項
（1）、某些水果、蔬菜（如橘子、西紅柿等）漿狀物泡沫太多，可加數(shù)滴丁醇或辛醇。
（2）、整個操作過程要迅速，防止還原型抗壞血酸被氧化。滴定過程一般不超過2min。滴定所用的染料不應(yīng)小于1mL或多于4mL，如果樣品含維生素C太高或太低時，可酌情增減樣液用量或改變提取液稀釋度。
（3）、提取的漿狀物如不易過濾，亦可離心，留取上清液進(jìn)行滴定。
原創(chuàng)作者：青島捷世康生物科技有限公司
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