β－葡萄糖醛酸苷酶（β-glucuronidase，β-GD）試劑盒說(shuō)明書(shū)
點(diǎn)擊次數(shù)：1103 日期：2018/6/27 16:43:59
β－葡萄糖醛酸苷酶（β-glucuronidase，β-GD）試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法 50 管/48 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義
β-GD 廣泛存在于動(dòng)物組織中，是一種參與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程的基質(zhì)降解酶，具有水解固
醇葡萄糖醛酸和酸性粘多糖等生理功能。該酶在肝細(xì)胞中含量較高。此外在胃癌組織中含量
豐富，測(cè)定胃液β-GD 活性對(duì)于研究胃癌具有重要的意義。
測(cè)定原理
β-GD 催化苯酚 β-D-葡萄糖醛酸產(chǎn)生游離的酚酞，通過(guò)測(cè)定苯酚含量反應(yīng)該酶活性高低。
需自備的儀器和用品
可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸
餾水。
試劑的組成和配制
提取液：液體60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體5mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入5mL 蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑仍
-20℃保存；
試劑三：液體37.5mL×1 瓶，4℃保存；
試劑四：1μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液10mL，4℃保存；
樣品測(cè)定的前處理
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，加入1mL
提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測(cè)定（在EP 管中加入下列試劑）
試劑名稱（μL） 加樣孔
測(cè)定管 標(biāo)準(zhǔn)管 空白管
試劑一 100 100 100
試劑二 100 100 100
樣本 50
1μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)液 50
蒸餾水 50
混勻后，37℃水浴30min
試劑三 750 750 750
混勻， 540nm 下測(cè)定各管吸光值
注意：標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測(cè)一次。
β-GD活性計(jì)算
（1）按樣本鮮重計(jì)算：
單位定義：每小時(shí)每g 鮮重樣品中催化產(chǎn)生 1μmol 酚酞的量為一個(gè)活力單位。
β-GD（μmol/h/g 鮮重）= (C 標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）
÷(W×V1÷V2)÷T=2×（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷W
（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位定義：每小時(shí)每mg 組織蛋白催化產(chǎn)生 1μmol 酚酞的量為一個(gè)活力單位。
β-GD（μmol/h /mg prot）= (C 標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）
÷(V1×Cpr)÷T=2×（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷Cpr
C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度， 1μmol/mL；V1：加入樣本體積：0.05mL；V2：加入提取液體積，
1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，0.5h；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。
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