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細(xì)菌培養(yǎng)基和抗生素

點(diǎn)擊次數(shù)：1529　日期：2015/7/20 11:41:30

細(xì)菌培養(yǎng)基和抗生素

LB培養(yǎng)基
配制每升LB（luria-bertani,LB)培養(yǎng)基，應(yīng)在950ml雙蒸水加入；細(xì)菌培養(yǎng)用胰化蛋白胨（bacto-tuyptone)10g，細(xì)菌培養(yǎng)用酵母提取物（bacto-yeast extract)5g，NaCl 10g。搖動容器直至溶質(zhì)完全溶解，用5mol/L NaOH(約0.2ml)調(diào)節(jié)PH值至7.0,加入雙蒸水至總體積為1L，在13Ibf/in（1.0354x10pa）高壓下蒸汽滅菌20min。
（二）含有瓊脂或瓊脂糖的培養(yǎng)基
先按上述配制液體培養(yǎng)基，高壓滅菌前加入下列試劑中的1份；細(xì)菌培養(yǎng)用瓊脂（Bacto-agar)15g/L（鋪質(zhì)平板），瓊脂糖7g/L(配制頂層瓊脂糖用）。
在15Ibf/in(1.034x10Pa）高壓下蒸汽滅菌20min。從高壓滅菌器中取出培養(yǎng)基時應(yīng)輕輕旋轉(zhuǎn)以使溶解的瓊脂或瓊脂糖能均勻分布于整個培養(yǎng)基溶液中。注意，此時培養(yǎng)基溶液可能過熱，炫動液體會發(fā)生暴沸。應(yīng)使培養(yǎng)基降溫至50℃，方可加入不耐熱的物質(zhì)（如抗生素）。為避免產(chǎn)生氣泡，混勻培養(yǎng)基時采用旋動的方式，然后可直接從燒瓶中傾除培養(yǎng)基鋪制平板。90mm制直徑的培養(yǎng)基皿約需30-50ml培養(yǎng)基。如果平板上的培養(yǎng)基有氣泡形成，可在瓊脂或瓊脂糖凝結(jié)前用本生燈灼燒培養(yǎng)基表面以除之。按設(shè)定的顏色記號在相應(yīng)平板的邊緣做標(biāo)記以區(qū)別不同的培養(yǎng)平板。
培養(yǎng)基完全凝結(jié)后，應(yīng)倒置平皿并貯存于4℃?zhèn)溆谩Ｊ褂们?-2h應(yīng)取出貯存在平皿。如果平板是新鮮制備的。在37℃溫育時會發(fā)汗，從而導(dǎo)致細(xì)菌可控或噬菌體噬癍在平板表面交互擴(kuò)散而增加交叉污染的機(jī)會。為了避免這一問題，可以拭去平皿內(nèi)部的冷凝水并把平皿倒置于37℃溫育數(shù)小時方宇使用，也可快速甩一下平皿蓋一出去冷凝水已盡可能減少污染的機(jī)會，除去蓋上的水滴時應(yīng)把開蓋的平皿倒置握在手上。
保存培養(yǎng)基
細(xì)菌可以再穿刺培養(yǎng)物中保存2年之久火災(zāi)甘油的培養(yǎng)物中無限期保存
穿刺培養(yǎng)物
使用容量為2-3ml并帶有螺口旋蓋和橡皮墊圈的剝離小瓶，加入相當(dāng)于2/3容量的融化LB瓊脂，旋上蓋子，但不擰緊，在15x10Pa高壓蒸汽下滅菌20min。從高壓蒸汽滅菌器中取出剝離試管，冷卻至室溫下寧晉蓋子。房事問保存?zhèn)溆谩?/span>
保存細(xì)菌時，用一滅菌的接種針挑取分散良好的單菌落，把針穿過瓊脂直達(dá)瓶底數(shù)次，蓋上瓶蓋并與擰緊，在瓶身和瓶蓋上均做好標(biāo)記，室溫下存放于暗處（普通的做法是將瓶蓋放松，在適當(dāng)溫度下培養(yǎng)過夜，然后擰緊瓶蓋并加封Parafilm膜，于室溫（做好于4℃）避光保存。
含甘油的培養(yǎng)物
在液體培養(yǎng)基中生長的細(xì)菌培養(yǎng)物；取0.85ml細(xì)菌培養(yǎng)物，加入0.15ml滅菌甘油（甘油應(yīng)在15x10Pa高壓蒸汽下滅菌20min）振蕩培養(yǎng)物使甘油分布均勻，然后轉(zhuǎn)移到標(biāo)記號的、帶有螺口和空氣密封圈的保存管內(nèi)，在乙醇-干冰或液氮中凍結(jié)后轉(zhuǎn)至-70℃長期保存。
復(fù)蘇菌種時，用滅菌的接種針刮拭凍結(jié)的培養(yǎng)物表面，然后立即把黏附在接種針上的細(xì)菌劃于含適當(dāng)抗生素的LB瓊脂平板表面，凍干保存的菌種管重置于-70℃，而瓊脂平板于37℃培養(yǎng)過夜。
（2）在瓊脂平板上生長的細(xì)菌培養(yǎng)無：從瓊脂平板表面刮下細(xì)菌放入裝有2mlLB的無菌試管內(nèi)，再加入等量的含有30%滅菌甘油的LB培養(yǎng)基，振蕩混合物使甘油完全分解均勻后，分裝于帶有螺口蓋和空氣密封圈的無菌試管中，按上訴方法冰凍保存、
抗生素如下
 

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