細菌不染色標本檢查法

懸滴法 泳衣觀察細菌的形態(tài)及動力。

1、區(qū)凹玻片，于凹窩周圍涂抹凡士林少許。

2、在蓋玻片中央放一接種環(huán)細菌的肉湯培養(yǎng)物（或將少許固體培養(yǎng)物混懸于一滴生理鹽水中）。

3、將凹玻片翻轉，使凹窩對準蓋玻片中央并蓋于其上，然后翻轉玻片，以小鑷子或接種環(huán)柄輕加壓力，使蓋玻片與凹窩周圍黏緊。如無凹玻片時，也可于載玻片適當位置加凡士林，其中墊以其他物體，然后使蓋玻片重疊于玻片之上。

4、將制備好的懸滴標本置于顯微鏡載物臺中央，先以低倍鏡找到懸滴的邊緣以后，在換高倍鏡觀察。

5、有鞭毛的細菌在液體中運動活潑；無鞭毛的細菌僅有位置不變的布朗運動。

   壓滴法（用途同懸滴法）

1、用接種環(huán)取菌液（獲獎少許固體培養(yǎng)物混懸于一滴生理鹽水中）2-3環(huán)，置于載玻片中央；

2、用內資加好蓋玻片，覆蓋于菌液上。在放置時，先使蓋玻片一邊接觸菌液，緩緩放下，以不產生氣泡為佳。

3、先以低倍鏡找好位置，在意高倍鏡或油鏡觀察。

革蘭染色法

革蘭染色法（Gramstain)是丹麥細菌學家革蘭于1884年發(fā)明，可將細菌鑒別為革蘭陽性菌、革蘭陰性菌兩大類。至今已逾百年，但人在廣泛使用，是細菌學中最為經典的染色法。

一般認為，革蘭染色的原理是由于格蘭陽性菌和陰性菌的細胞壁機構與化學組成不同。革蘭陽性菌的細胞壁較厚，肽聚糖含量多，且交聯(lián)度大，脂類含量少，經95%乙醇脫色時，肽聚糖層的孔徑變小，通透性降低，結晶紫-碘復合物不易被脫掉而保留紫色；革蘭陰性菌的細胞壁較薄，含有較多的類脂質，而肽聚糖的含量較少，乙醇脫色時溶解外層類脂質，致使細胞壁通透性增高，結晶紫-碘復合物容易被乙醇溶解而脫色，經復染后呈紅色。

制標本片

1、圖片：取一接種環(huán)生理鹽水放于載玻片的一段，挑少許變性桿菌或葡萄球菌培養(yǎng)物與鹽水混勻，土城直徑約1cm的圖片，涂片應薄而均勻。

2、干燥：圖片放置室溫中，待其自然干燥。

3、固定：標本干燥后，手執(zhí)玻片的一段標本面向上，通過究竟燈火焰三次，約2-3s（玻片反面觸及皮膚，以不燙為度，以殺死細菌并使之固定于玻片上），待冷卻后染色。

染色 將治好的標本片按下列步驟進行染色；

1、滴加結晶紫染液初染1min，水洗。

2、滴加盧戈氏碘液媒染1min，水洗。

3、滴加95%乙醇脫色，搖動玻片0.5-1min，水洗。

4、滴加稀釋付紅染液復染0.5-1min，水洗，洗水紙吸干后鏡檢。

實驗結果；標本片滴香柏油一滴，用油鏡觀察，呈紫色的為格蘭陽性菌，呈紅色的為革蘭陰性菌。